液相色譜系統(tǒng)中液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相,稱(chēng)為經(jīng)典液相色譜法,此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)(常有幾個(gè)小時(shí))。液相色譜法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。
液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,小顆粒具有高柱效,但會(huì)引起高阻力,需用高壓輸送流動(dòng)相,故又稱(chēng)高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而稱(chēng)為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也稱(chēng)現(xiàn)代液相色譜。
液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn):
高壓:流動(dòng)相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí),受到的阻力較大,為了能迅速通過(guò)色譜柱,必須對(duì)載液加高壓。
:分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到*分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
高靈敏度:紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng,進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。
應(yīng)用范圍廣:百分之七十以上的有機(jī)化合物可用液相色譜分析,特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢(shì)。
分析速度快、載液流速快:較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個(gè)樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成,一般小于1小時(shí)。
此外液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn),但也有缺點(diǎn),與氣相色譜相比各有所長(zhǎng),相互補(bǔ)充。液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等)中,如果流動(dòng)相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。